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变形链球菌表面蛋白抗原(PAc)的A区和P区融合共表达、纯化及抗原性研究
变形链球菌 PAc 重组蛋白 龋齿
2009/10/29
变形链球菌（Streptococcus mutans）是引起人类龋齿的主要致病菌,其表面蛋白(PAc)是龋齿疫苗研究的主要对象.在该研究中,变形链球菌pac基因的功能A区和P区经PCR扩增后,以连接链Gly4SerGly4连接,并克隆至pET32a质粒中构建成pET32a-A-P重组表达载体,经IPTG诱导表达后,表达产物A-P重组蛋白(rA-P蛋白)经饱和硫酸铵沉淀、镍亲和层析、疏水层析...
目的:构建携带变形链球菌表面蛋白pac 基因A 区片段的原核高效表达系统。方法:对含变形链球菌表面蛋白pac 基因的pPC41 质粒进行PCR 扩增,获得了pac 基因A 区片段;将扩增获得pac 基因A 区片段与表达质粒pET172b 定向克隆,重组质粒用BamHI ,EcoRV双酶切后电泳鉴定。结果:获得携带pac 基因A 区片段的重组质粒。结论:利用基因工程技术获得的重组质粒为后继工作准备了...
目的: 从大肠杆菌克隆子中提取和纯化质粒DNA pPC41和pcDNA 3。方法: 采用碱裂解法将质粒DNA 从菌体细胞中分离出来, 进一步用聚乙二醇沉淀法、透析袋电洗脱法、低溶点胶回收法、玻璃纤维柱层析法纯化质粒DNA。用分光光度法测其A 260、A 280值, 确定其浓度和纯度。通过酶切分析确定其质粒大小。结果: 4种方法获得的质粒DNA 浓度为0112～ 0124 göL , 聚乙...
目的: 寻找一种成本较低又可获得较高纯度质粒DNA 的方法。方法: 根据玻璃纤维质粒纯化层析柱分离纯化核酸的原理, 对其使用方法进行改进。使一次性使用的玻璃纤维层析柱能够重复使用。利用分光光度法测定12次重复使用获得的质粒DNA 浓度和纯度。进一步利用酶切实验、体外连接和转化实验对重复使用玻璃纤维层析柱获取的质粒DNA 进行检测。结果: 重复使用玻璃纤维层析柱12次获得的质粒DNA 在浓度和纯度上...