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观察重组血管紧张素(1-7)[angiotensin 1-7,Ang(1-7)]对大鼠急性心肌梗死(acute myocardial infarction,AMI)后细胞外基质重构的影响,并探讨其可能的分子机制。 方法 40只成年雄性SD大鼠按随机数字表法分为4组:假手术组(SHAM)、心肌梗死组(MI)、报告基因组(MI+EGFP)和Ang(1-7)组[MI+Ang(1-7...
探讨肌肉生长抑制素前肽(myostatin propeptide, MPRO)对C2C12成肌细胞葡萄糖摄取、氧化及糖原合成的影响及其作用机制。方法 诱导成熟的C2C12成肌细胞分为对照组、胰岛素组、绿色荧光蛋白(GFP)组、胰岛素+GFP组、MPRO组及胰岛素+MPRO组,经相应处理后应用2-脱氧-右旋-[1-14C]葡萄糖检测MPRO对C2C12细胞葡萄糖摄取、氧化及糖原合成的影响,应用Wes...
构建血管紧张素转换酶2(ACE2) 的复制缺陷重组腺病毒Ad-ACE2,并观察其对载脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠动脉硬化黏附分子的影响及意义。方法 采用RT-PCR反应,从小鼠肾脏组织中扩增出小鼠ACE2 基因全长的cDNA 序列,克隆到pMD18-T载体,再亚克隆到pDC316载体,构建穿梭质粒(pDC316-ACE2)。穿梭质粒与腺病毒骨架质粒进行同源重组,形成重组腺病毒质粒,重组...
观察人脐血源基质细胞(hUCBDSCs)经腺病毒介导的缝隙连接蛋白43(Cx43)转染后Cx43基因表达的变化以及转染前后分别对CD4+T分泌IL-4、CD8+T分泌IFN-γ的影响。方法 用重组腺病毒Ad-Cx43-GFP转染hUCBDSCs,荧光显微镜报告基因GFP的表达并计算转染效率,RT-PCR法、Western blot法、免疫荧光法检测hUCBDSCs转染前后Cx43基因及蛋白表达情况...
探讨转染Cx43(Connexin 43)人脐血源基质细胞(hUCBDCs)对人急性淋巴细胞白血病细胞SUP-B15增殖的影响。方法 重组腺病毒转染以上调人脐血源基质细胞Cx43表达,建立人脐血源基质细胞和SUP-B15细胞共培养模型,选取共培养72 h为时间点收集悬浮SUP-B15细胞,采用CCK-8检测SUP-B15细胞的增殖,流式细胞仪检测细胞凋亡及细胞周期。结果 人脐血源基质细胞抑制SUP...
探讨乙型肝炎病毒x基因(hepatitis B virus x,HBx)转染人近端肾小管上皮细胞系(HK-2)后其对T 细胞激活、分化的影响。 方法 分4 组:实验组(即转染HBx 质粒的HK-2细胞+CD4+ T 细胞)、阴性对照组(即转染HBx 空载质粒的HK-2 细胞+CD4+ T 细胞)、单独培养组(即CD4+ T细胞)和空白对照组(未处理HK-2细胞+CD4+ T细胞)。体外培养...
观察信号转导与转录激活子1(STAT1)siRNA转染后高糖培养人肾小球系膜细胞(HMC)的增殖情况及细胞内STAT1、磷酸化(p)STAT1、STAT3、p-STAT3蛋白及下游TGF-β1的表达变化,探讨高糖状态下STAT1和STAT3活性变化及STAT亚型变化对TGF-β1的影响。 方法 设计并合成针对STAT1基因的3个特异性siRNA序列(STAT1-siRNA),应用Lipofe...
探讨腺病毒介导hRAMP1基因转染间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSCs)移植对心肌梗死后新生血管生成及其可能机制。 方法 密度梯度离心并贴壁培养获得兔骨髓MSCs,并分别转染pAd2-hRAMP1或pAd2-EGFP 后给予CGRP刺激,ELISA法测定细胞培养上清液中VEGF和HGF水平。建立心肌梗死再灌注兔模型,采用随机数字表法分为MSChR...
将体外培养、纯化并转染VEGF165 基因的新西兰兔自体骨骼肌成肌细胞植入心肌梗死区,观测转染VEGF165 基因的成肌细胞移植对改善梗死区心肌血运重建和心功能的影响。方法:采用pcDNA3.1-VEGF165 和pcDNA3.1 质粒转染经体外培养及纯化的新西兰兔自体骨骼肌成肌细胞。结扎兔冠状动脉致局部心肌梗死后2 周,分别于心肌梗死区移植转染VEGF165 基因成肌细胞( 实验组,n=8) 和...
探讨脂质体和电穿孔法在HBV X基因转染L02细胞中的差别及X基因蛋白产物对CⅡTA和HLA-DR表达的影响。 方法 构建HBV X基因重组表达质粒,通过电穿孔和脂质体法转染人正常肝细胞L02细胞,以绿色荧光蛋白(enhance green fluorescent protein,EGFP)表达水平评价转染效率,流式细胞技术检测L02细胞HBV X蛋白的表达水平。RT-PCR、...
活化的肺泡巨噬细胞(alveolar macrophage,AM)具有抗肿瘤功能,γ干扰素(interferon-γ,INF-γ)是巨噬细胞的活化因子之一,其与巨噬细胞体外共同培养可增强巨噬细胞的免疫功能。本研究旨在了解人INF-γ基因体外转染肺癌患者的AM后对其抗肿瘤功能的影响。方法 经肺泡灌洗获AM,分离纯化,以INF-γ基因转染AM,以RT-PCR方法和ELISA方法检测人INF-γ基因的成...
将体外转录的癌胚抗原(carcinoembryonic antigen,CEA)mRNA转染入成熟树突状细胞(dendritic cell,DCs),观察其体外诱导的特异性抗肿瘤作用。方法: GM-CSF、IL-4、TNF-α体外诱导成熟DCs并用流式鉴定。构建pcDNA3.1-CEA载体,体外转录为CEA mRNA,电穿孔法将CEA mRNA转染入DCs。流式细胞术检测转染后DCs中CEA蛋白的...
目的 采用不同质粒转染方法介导重组pIRES2-EGFP-TFPI-2质粒转染U937单核细胞,以获得较高转染效率的方法。方法 分别采用电穿孔法、Effectene转染试剂、Lipofectamine 2000转染试剂、电穿孔+Effectene转染试剂、电穿孔+Lipofectamine 2000转染试剂及HilyMax转染试剂等不同方法介导质粒进行转染,测定不同方法的转染效率、目的基因mRNA...
目的: 我们已经报道锰型超氧化物岐化酶(MnSOD)高表达可明显抑制SGC7901胃癌细胞的增殖,本研究拟进一步探索其中所涉及的分子机制. 方法: 利用DCFH-DA荧光染色方法检测正义、反义及空载SGC7901胃癌细胞株内的活性氧水平.透射电镜下观察肿瘤细胞形态及细胞器结构改变.RT-PCR方法检测三者缺氧诱导因子HIF-1alpha的表达. 结果: 正义MnSOD-7901胃癌细胞胞内ROS下...
目的: 利用反义核酸技术,研究体外胰岛素样生长因子-I(IGF-I)反义寡核苷酸转染对肝癌细胞增生、分化及凋亡的影响,探讨寡核苷酸转染治疗肝癌的可行性.方法: 合成针对IGF-I的寡核苷酸片段,利用脂质体包裹反义IGF-I寡核苷酸片段瞬时转染人肝癌细胞系BEL-7402细胞,MTT法检测细胞增生; 放免法检测培养细胞上清中AFP,CEA的分泌量; 免疫组化法检测转染细胞AFP,PCNA表达的变化;...

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