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探讨Notch1 siRNA对体内外人骨髓瘤细胞RPMI-8226细胞硼替佐米药物敏感性的影响。方法 体外采用Notch1 siRNA转染RPMI-8226细胞，CCK-8实验检测细胞增殖及硼替佐米药物的敏感性;Western blot检测各组细胞Notch1蛋白表达变化;将RPMI-8226细胞皮下注射于NOD/SCID小鼠，建立人多发性骨髓瘤(MM)小鼠移植瘤模型，将成瘤小鼠分为三组：NS+b...
靶向肽在递送siRNA进行肺癌治疗研究中的应用
肺肿瘤 靶向肽 siRNA
2014/9/29
肺癌被认为是全球发病率最高的一种恶性肿瘤，其对化疗药物不敏感且易产生耐药性，因此增强肺癌药物治疗效果是近年来研究的热点。siRNA是一种小RNA分子，可以沉默与之互补的目标mRNA，是一种基因治疗手段。靶向肽是一类小分子多肽，它可以与siRNA联合使用，利用其与肿瘤表面物质特异性结合发挥靶向作用。联合靶向肽的特异性和siRNA的治疗作用，增加siRNA在靶点位置的聚集，增强沉默效果，可以提高肺癌对...
构建GPC3基因短发夹干扰RNA(shRNA)慢病毒载体，观察GPC3基因对人肝癌细胞系Huh-7凋亡的影响，探讨GPC3基因影响肝癌细胞生长的机制，为肝癌的基因治疗提供理论基础。方法 采用RNA干扰技术转染肝癌细胞系Huh-7，荧光定量 PCR 检测GPC3基因在多种肝癌细胞株中的表达情况。构建重组靶向GPC3基因的小干扰RNA序列PGC-shRNA-GPC3，以脂质体(lipofectamin...
Survivin siRNA沉默对非小细胞肺癌细胞生物学的影响
癌 非小细胞肺 反转录聚合酶链反应 印迹法
2014/6/24
探讨凋亡抑制蛋白(Survivin)对非小细胞肺癌(NSCLC)H1299细胞株的生物学影响。方法 通过脂质体介导将Survivin基因siRNA 瞬时转染H1299细胞。采用RT-PCR及Western blot 检测转染后H1299细胞内Survivin 基因的表达水平。MTT比色法、流式细胞术(FCM)及Western blot观察细胞增殖、凋亡、周期及Caspase-9蛋白表达变化情况。结...
体外siRNA靶向抑制PI3Kp85α基因对人胃癌AGS细胞株的作用
磷脂酰肌醇3激酶p85α亚单位 增殖 迁移 侵袭
2014/11/6
探讨小干扰RNA（siRNA）技术沉默PI3Kp85α基因表达对人胃癌细胞株AGS增殖、迁移及侵袭能力的影响。方法 设计3条靶向抑制PI3Kp85α基因的siRNA片段（siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3），分别转染人胃癌AGS细胞，并设阴性对照组及空白组。Western blotting检测siRNA序列对PI3Kp85α蛋白表达的影响。利用MTT实验、划痕迁移实验和Transwel...
研究3′-磷酸腺苷-5′-磷酰硫酸转运体1（adenosine-3-phospho-5-phosphosulfate transporter 1，PAPST1）在髓母细胞瘤中的表达情况，探讨其对髓母细胞瘤细胞系增殖活性的影响。 方法 采用qRT-PCR法检测25例髓母细胞瘤标本、1例原代培养髓母细胞瘤细胞、3例髓母细胞瘤细胞系PAPST1表达，并与正常小脑组织比较，利用免疫组...
探讨Foxp1对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 体外合成干扰Foxp1功能的小核酸片段（siRNA Foxp1），通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中，利用包装细胞（293T）将三质粒系统组装为完整的反转录慢病毒载体（lenti-pLL3.7-Foxp1-siRNA），感染高表达Foxp1的肝癌细胞株。同时构建不含有Foxp1-siRNA序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照...
研究siRNA CD31靶向沉默血管内皮细胞中血小板内皮细胞黏附分子1（platelet endothelial cell adhesion molecule 1， PECAM-1 ）基因对鼠源性血管内皮瘤（murine hemangioendothelioma，EOMA）细胞增殖及其VEGF表达的影响。 方法: 实验分为裸siRNA CD31组、siRNA CD31-FAM组、稳定阴性对照 （S...
U6/H1双启动子siRNA表达框架构建及其对肿瘤细胞端粒酶活性的干扰作用
末端转移酶 RNA干扰 启动区（遗传学）
2014/10/31
构建针对端粒酶hTERT基因的U6/H1双启动子siRNA表达框架（SEC），并观察其转录产物对HeLa细胞端粒酶活性的干扰作用。 方法：利用融合PCR技术，针对人端粒酶hTERT基因开放阅读区构建3条U6/H1双启动子SEC以及针对其3'端非翻译区构建1条U6/H1双启动子SEC，对各SEC鉴定后，分别转染人宫颈癌HeLa细胞，用端粒重复序列扩增法（TRAP）检测HeLa细胞的端粒酶活性。 结果...
siRNA抑制转化生长因子-β1对小鼠黄韧带骨化的影响
转化生长因子-β1 骨形态发生蛋白-2 小干扰RNA
2014/9/26
运用RNA干扰（RNAi）技术抑制转化生长因子-β1（TGF-β1）在小鼠黄韧带成纤维细胞中的表达，探讨其对脊柱黄韧带骨化的影响。方法 培养小鼠黄韧带成纤维细胞，经人重组骨形态发生蛋白-2（rhBMP-2）诱导骨化，对骨化成功的黄韧带细胞（成骨细胞）进行形态学观察，并对其进行碱性磷酸酶（ALP）染色及钙结节茜素红染色鉴定；构建靶向TGF-β1基因的小干扰RNA（siRNA）真核表达载体（siRNA...
采用siRNA干扰技术沉默人非霍奇金淋巴瘤Raji细胞中Pokemon基因，观察Raji细胞增殖活性的变化，并探讨其可能的分子机制。方法 构建靶向Pokemon基因的siRNA重组慢病毒载体并转染Raji细胞。采用实时定量PCR法和Western blotting法检测Raji细胞Pokemon基因的沉默效果，在Raji细胞中沉默Pokemon基因的表达后采用实时定量PCR法和Western ...
探讨DKK1 siRNA干扰的DKK1低表达对子宫内膜癌Ishikawa细胞侵袭、迁移能力的影响及作用机制。方法 瞬时转染DKK1 siRNA至培养的子宫内膜癌Ishikawa细胞;应用实时定量PCR和蛋白免疫印迹方法分别检测转染前后细胞中DKK1的mRNA和蛋白表达;应用Transwell实验检测癌细胞侵袭、迁移能力。应用荧光显微镜观察转染前后Wnt/β-catenin信号通路中活性β-cate...
筛选针对STAT5A基因有效的siRNA，研究抑制STAT5A基因的表达对人肝癌HepG2细 胞增殖、周期及凋亡的影响，探讨STAT5A基因在肝癌发生发展中的作用。方法 设计并化学合成 针对STAT5A基因三个靶点的siRNA，采用脂质体法转染人肝癌细胞HepG2，分别用半定量RT-PCR、 Western blot技术检测转染后HepG2细胞STAT5A mRNA和蛋白表达的变化，从中筛选出一段...
探讨小干扰RNA（siRNA）靶向抑制细胞分裂周期相关蛋白5（CDCA5）基因表达对人肝癌HepG2细胞株增殖及凋亡的影响。方法 优化siRNA转染条件，将3条靶向抑制CDCA5基因的siRNA载体片段（序列1、2和3）分别高效转染人肝癌HepG2细胞（A、B和C组），并设阴性对照组（NC组）及空白组。免疫印迹法检测转染72h各组CDCA5蛋白的表达水平。CCK-8法检测转染24、48、72、96...