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泛素羧基末端水解酶-1（ubiquitin C terminal hydrolase-L1,UCH-L1）是近期研究较多的一类癌基因，在多种恶性肿瘤如食管癌、肺癌、乳腺癌等中均有异常表达和活性增强。本研究旨在探讨脂质体转染UCH-L1 siRNA对人肺腺癌H157细胞增殖、凋亡的影响。方法 人工合成抑制UCH-L1基因的siRNA片段，通过脂质体转染到H157细胞内，显微镜下观察其形态学变化；流式...
靶向cripto siRNA转染对裸鼠实验性大肠癌细胞肝转移的影响
大肠肿瘤 肝转移 畸胎瘤衍生生长因子-1
2010/10/15
目的 研究cripto基因对人大肠癌细胞迁移、侵袭和肝转移的影响。方法 以cripto基因mRNA小干扰RNA（small interfering RNA，siRNA）转染人大肠癌SW480细胞后，分别采用荧光实时定量RT-PCR和Western blot检测cripto基因mRNA和蛋白水平，以划痕试验方法评测癌细胞迁移能力；用Boyden模型观察癌细胞侵袭能力。以脾切除法建立裸鼠大肠癌肝转...
构建可同时表达野生型p53 (wt-p53)及siRNA-mdm2的重组真核表达载体用于激素非依赖性前列腺癌的联合基因治疗。方法：利用亚克隆、T-A克隆和PCR技术合成并构建pcDNA3.1-p53、siRNA-mdm2、p53/siRNA-mdm2和siRNA-scramble重组质粒。脂质体法将上述重组质粒转染至PC-3细胞，半定量RT-PCR和Western blotting检测共表达质粒对...
探讨Moeisn蛋白参与影响人脑胶质细胞瘤（U251）细胞生长和侵袭的可能途径。方法以人脑胶质细胞瘤U251细胞系为研究对象，针对Moesin编码基因设计小干扰RNA片段转染入细胞，通过反转录聚合酶链反应(RT-PCR)筛选沉默效率最高的siRNA片段进行后续实验。通过对设计的3组不同干预的U251细胞（空白组、阴性对照组、转染组）进行RT-PCR测定PDGF的表达，以及流式细胞方法测定CD44的...
细胞内siRNA传递：应用修饰的细胞穿透肽从内涵体逃逸
阳离子型细胞穿透肽 RNA药物递送 RNA干扰
2010/3/31
RNA干扰介导的基因沉默是一种有前景的基因疗法，其中使RNA安全有效地进入胞浆很重要。细胞膜是RNA传递的首要障碍，也最难跨越，带负电性的细胞膜强烈排斥RNA。各种阳离子聚合物已被作为RNA载体，与RNA相互作用，掩盖其负电荷，形成细胞穿透性复合物。阳离子型细胞穿透肽（cell-penetrating piptide,CPP）能携RNA一起穿过细胞膜进入细胞内部，在以CPP为基础的RNA传递中，大...
治疗性siRNA的研究进展
小分子RNA 基因 治疗
2009/11/17
具有干扰作用的小分子RNA（siRNA）能使哺乳动物体细胞的基因表达停止，因此，如果知道了引起某种疾病的基因的mRNA序列，则可以使用siRNA来阻止其表达。目前，siRNA的转入方式主要有两种，即外源性方式和内源性方式。实验表明，siRNA可以使多种细胞内的基因表达沉默，因此除了用于分析基因功能、确定靶标的有效性外，它在基因治疗方面也有很大的应用价值。
目的：研究siRNA(small interference RNA)对bcl-2基因表达的抑制作用。 方法： 依据Ambion公司在网上提供的设计软件，设计合成以bcl-2基因为靶标的siRNA，通过脂质体将合成的siRNA转入U251细胞株，以未转染细胞以及bcl-2的反义药物G3139为对照，经MTT法检测siRNA对细胞生长的抑制以及流式细胞仪检测细胞周期的改变，用RT-PCR和免疫组织化学...
目的： 探讨靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的siRNA抑制舌癌Tca8113细胞的效果和机制。方法: 构建hTERT基因的siRNA(siRNA-hTERT1),阳离子脂质体法转染舌癌Tca8113细胞,以无同源性的siRNA-hTERT2作阴性对照,以未转染的细胞为空白对照。MTT法检测细胞生长率,流式细胞术分析细胞凋亡的情况。建立裸鼠舌癌皮下种植瘤模型,瘤内注射法将siRNA-hTERT...
rAAV-Slug-siRNA载体的构建及其抗胰腺癌的实验
小干扰 腺相关腺病毒 胰腺癌 凋亡
2013/12/27
构建并制备携带目的基因的rAAV-EGFP-Slug-siRNA（Slug-siRNA）病毒载体，探讨Slug干扰抗胰腺癌作用。方法首先构建pDC316-EGFP-Slug-siRNA质粒,以PCR鉴定正确的pDC316-EGFP-Slug-siRNA克隆为模板扩增EGFP-Slug-siRNA片段,EcoRⅠ和SalⅠ双酶切回收PCR产物; 酶切pSNAV2.0-lacz-α载体质粒,并与上述产...
目的:本研究旨在应用RNA干扰技术，诱导转基因肺癌细胞HLCDG1基因沉默并观察其对肺癌细胞周期和增殖的影响。 方法:构建HLCDG1基因短小干扰双链RNA表达载体，筛选HLCDG1基因表达沉默的肺癌细胞株并应用MTT和流式细胞仪分析这一肺癌细胞株增殖和细胞周期分布状况。 结果:根据siRNA表达载体的设计原则，构建了能在哺乳动物细胞稳定表达的siRNA载体5个（4个位点匹配实验组和1个位点错配对...
目的：探讨靶向主要组织相容性复合物(MHC)Ⅱ类抗原转录激活因子（MHCⅡtransactivator CⅡTA）的化学合成小干扰RNA(small interfering RNA)抑制大鼠角膜基质细胞表面的MHCⅡ类抗原表达的可行性。 方法： 设计并合成靶向CⅡTA基因的5条siRNA，分离并培养大鼠角膜基质细胞，经重组大鼠IFN-γ刺激后，在阳离子脂质体的介导下，将siRNA转染大鼠角膜基质细...
siRNA对生长抑素基因表达的抑制作用
生长抑素 RNA干扰
2009/8/12
目的: 研究siRNA对生长抑素(SOM)基因表达的抑制作用. 方法: 根据生长抑素基因序列设计和合成RNA干扰的靶序列, 应用RiboMAXT7体外转录试剂盒合成siRNA并转染胃癌细胞系SGC-7901, 经RT-PCR, 免疫组化法检测生长抑素在mRNA和蛋白质水平的抑制效应. 结果: 成功合成了siRNA(21 bp). 胃癌细胞系SGC-7901中SOM基因的表达呈强阳性, 分布在胞质中...
靶向siRNA抑制幽门螺杆菌vacA表达
RNA干扰 空泡毒素A 幽门螺杆菌
2009/8/6
目的: 观察靶向siRNA能否抑幽门螺杆菌(H pylori)vacA基因表达. 方法: 合成靶向H pylori vacA基因5对特异siRNA(实验组: vacA-s1, vacA-s2, vacA-s3, vacA-s4, vacA-s5)和1对非特异siRNA(对照组). 通过电穿孔法使siRNA转化至H pylor内, 观察转化效率和转化1, 6, 12, 24, 48 h mRNA和蛋...
目的:应用siRNA表达载体介导的RNAi技术,观察RNA干扰沉默生存素基因对胃癌MGC-803细胞增殖的影响.方法:用脂质体介导将生存素siRNA表达质粒转染MGC-803细胞,通过倒置显微镜观察转染后细胞形态学的变化,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测细胞增殖活性,流式细胞术分析细胞周期的变化,逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)方法检测生存素mRNA的表达水平.结果:生存素siRNA表达质粒转染...
靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响
靶向survivin siRNA 肝癌细胞
2009/7/28
目的: 探讨转入靶向survivin的siRNA对肝癌细胞生物学行为的影响.方法: 设计、合成一对survivin编码基因的反向重复序列，中间间隔9个核苷酸序列，通过定向克隆至载体PSilencer2.1，构建siRNA真核表达载体，经稳定转染HepG2细胞后对转基因后肿瘤细胞的生物学行为进行观察.结果: 测序证实siRNA真核表达载体构建成功. 通过RT-PCR及流式细胞术检测，siRNA在mR...