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探讨siRNA沉默CD99基因表达对髓母细胞瘤细胞系DAOY细胞增殖和凋亡的影响。方法 利用CD99 siRNA转染髓母细胞瘤DAOY细胞,细胞分为沉默1组(转染CD99 siRNA-1#)、沉默2组(转染CD99 siRNA-2#)、对照组(转染siRNA阴性对照),采用实时荧光定量PCR和免疫印迹法检测沉默效果。利用CCK-8细胞增殖实验、平板克隆形成实验检测细胞增殖能力,采用流式细胞术检测细...
探讨Foxp1对肝癌细胞增殖、凋亡和迁移的影响。方法 体外合成干扰Foxp1功能的小核酸片段(siRNA Foxp1),通过重组技术将其插入到慢病毒三质粒系统的转移质粒中,利用包装细胞(293T)将三质粒系统组装为完整的反转录慢病毒载体(lenti-pLL3.7-Foxp1-siRNA),感染高表达Foxp1的肝癌细胞株。同时构建不含有Foxp1-siRNA序列的直接三质粒系统包装的空病毒载体对照...
目的: 探讨靶向端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的siRNA抑制舌癌Tca8113细胞的效果和机制。方法: 构建hTERT基因的siRNA(siRNA-hTERT1),阳离子脂质体法转染舌癌Tca8113细胞,以无同源性的siRNA-hTERT2作阴性对照,以未转染的细胞为空白对照。MTT法检测细胞生长率,流式细胞术分析细胞凋亡的情况。建立裸鼠舌癌皮下种植瘤模型,瘤内注射法将siRNA-hTERT...
目的:构建并鉴定巨噬细胞移动抑制因子(MIF)特异性siRNA重组逆转录病毒载体,将其导入PHOENIX细胞中,筛选出分泌MIF-siRNA病毒的包装细胞,其分泌的病毒可以抑制MIF蛋白的表达,并初步了解稳定沉默MIF细胞株的特性。方法:体外合成含针对MIF特异基因序列的寡核苷酸并定向克隆入pSuper.retro逆转录病毒载体,构建的载体通过酶切、测序鉴定后,采用脂质体介导转染包装病毒细胞株PH...
目的:探讨针对fas的siRNA对大鼠原位肝移植供肝冷保存和缺血再灌注损伤的拮抗作用及机制。方法:(1)化学合成针对大鼠fas基因的3对siRNA,转染大鼠正常肝细胞(BRL细胞),筛选抑制效果最高的siRNA序列。(2)对SD大鼠用水压注射法转染fas siRNA,48 h 后取肝,供肝冷保存2、4、6 h 后行细胞凋亡指数及fas表达检测。(3)对照组、fas siRNA组各25对SD雄性大鼠...
目的: 利用RNA干扰(RNAi)技术原理,优化小分子干扰RNAsiRNA)电转化幽门螺杆菌(Hp)的条件,并观察电转化后空泡毒素基因(VacA)的mRNA表达是否受到抑制。方法: 合成5对特异siRNA为实验组:S1、S2、S3、S4、S5,1对非特异siRNA为对照组:S6。设定不同的电场强度及脉冲时间,探索电转化Hp的最佳条件,并观察转化效率和电转化后Hp存活率。在最佳电转化条件下将上述6...
目的:用RNAi技术抑制哺乳动物神经元中外源报告基因的表达,并探讨该过程中RNAi的时间及剂量效应,为利用RNAi技术研究神经元基因功能提供参考。方法:采用神经细胞来源的细胞系neuro-2a小鼠神经瘤细胞为模型,将外源绿色荧光蛋白(GFP)基因转染到neuro-2a细胞内,利用体外转录法合成siRNA,分为3个剂量组对其进行干扰。结果:Neuro-2a细胞可以被有效地转染,而且siRNA在neu...
目的: 观察Snail1 siRNA对高糖诱导的肾小管上皮细胞向间充质细胞转变(TEMT)的影响。方法: 原代培养肾小管上皮细胞分为5组:(1)对照组(含糖5.5 mmol/L);(2)高糖组(含糖25 mmol/L);(3)Snail1 siRNA处理组,转染Snail1 siRNA,6 h后更换为高糖(含糖25 mmol/L)培养;(4)control siRNA处理组,转染control s...
目的: 快速筛选出高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA,为进一步应用RNA干扰的相关研究奠定基础。方法: 应用RT-PCR扩增人HSV-1 F株UL40基因,将其连接到pEGFP-N1构建pEGFP-N1-UL40融合蛋白表达质粒。将化学合成的针对UL40基因的siRNA与重组质粒共转染Vero细胞,通过观察绿色荧光蛋白报告基因的表达筛选高效沉默人HSV-1 UL40基因的siRNA。结...
目的:设计并筛选能有效抑制人肝癌SMMC-7721细胞、人结肠癌Caco2细胞、人胃癌SCG-7901细胞增殖的增殖细胞核抗原(PCNA) siRNA。方法:总结以往提出的siRNA 设计原则的基础上,设计4 条PCNA siRNA,体外转录合成PCNA siRNA;并作用于3 种肿瘤细胞,WST-8法检测细胞增殖活性,筛选能有效抑制肿瘤细胞增殖的siRNA序列;RT-PCR检测细胞PCNA mR...
目的:构建携带小鼠脂联素(Acrp30)siRNA腺病毒载体,并检测其对小鼠脂肪细胞Acrp30表达以及对3T3-L1脂肪细胞基础葡萄糖转运的影响。方法:设计并化学合成小鼠脂肪细胞Acrp30 siRNA片段,将其亚克隆入AdEaxy XL 腺病毒载体系统,在293细胞内包装扩增为重组腺病毒。用此重组腺病毒感染3T3-L1脂肪细胞,用RT-PCR和ELISA检测其Acrp30 mRNA和蛋白表达。...
目的: 利用RNAi技术探讨P21蛋白表达对HeLa 细胞周期解耦联和细胞凋亡的影响。方法: 丝裂霉素刺激HeLa细胞后可诱导P21蛋白高表达,采用脂质体转染技术将p21 siRNA 载体转染至HeLa细胞48 h后给予MMC刺激,利用流式细胞术检测HeLa细胞的P21蛋白表达、 细胞倍体的形成和细胞凋亡的改变。结果: p21 siRNA 载体可有效干扰经MMC诱导的HeLa细胞中P21蛋白表达,...
目的: 探讨CD73对乳腺癌细胞MB-MDA-231与细胞外基质黏附的影响及其机制。方法: ① 构建CD73 siRNA表达载体,脂质体介导转染MB-MDA-231细胞。② 流式细胞仪检测瞬时转染效率,G418筛选稳定转染克隆。③ 半定量RT-PCR和Western blotting检测转染细胞 CD73 mRNA及蛋白表达。④ 细胞黏附实验检测MB-MDA-231细胞CD73基因表达抑制后与细胞...

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