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2021年11月16日前，由中国水产科学研究院长江水产研究所朱挺兵等申请的“一种基于微卫星荧光多重PCR的长鳍吻鮈亲子鉴定方法”获国家发明专利授权，专利号为201710091509.5。
该发明提供了一种基于微卫星荧光多重PCR的长鳍吻鮈亲子鉴定方法。其步骤包括提取待检测样本的基因组DNA，利用引物组合进行多重PCR扩增反应，通过测序仪进行等位基因分型，通过似然率检测待测个体与亲本基因型之间的相...
根据罗氏沼虾(Macrobrachium rosenbergii)幼体培育期主要细菌性病原阴沟肠杆菌 omp A
基因序列、产气肠杆菌 gry B 基因序列设计特异性引物，通过对 PCR 扩增产物进行测序鉴定与特异
性和敏感性试验，建立了两种病原菌的 PCR 快速检测方法，并对发病样品进行了检测。结果显示，
设计的阴沟肠杆菌与产气肠杆菌检测引物能分别扩增出与预计大小一致的 385 bp和 2...
本研究检测了分离自发病大菱鲆、半滑舌鳎及鲤鱼的22株病原鳗弧菌(Vibrio anguillarum)毒力相关基因的携带情况，并建立了病原鳗弧菌的分子生物学检测方法。以PCR方法检测8个毒力相关基因的分布，结果显示，22株病原鳗弧菌均可扩增出6个基因(empA、vah1、vah4、flaA、rtxA和tonB)目的条带，未扩增出virA和angM基因；针对vah4和rtxA设计引物进行双重PCR扩...
细菌鞭毛蛋白编码基因hag具两端的保守序列及中间可变区域，在细菌的分类和鉴定中可作为分子标记。本研究克隆了坚强芽孢杆菌鞭毛蛋白编码基因hag部分序列，根据所得核酸序列设计套式引物Bfho和Bfhi，进行菌株的套式PCR特异性检测。此外，采用内引物Bfhi建立坚强芽孢杆菌荧光定量PCR特异性检测方法并确定该方法的检测限，对15个模拟样品进行检测并对阳性组中坚强芽孢杆菌的含量进行定量分析。结果显示，克...
利用世界动物卫生组织（OIE）推荐的4对引物（389F/R、392F/R、77012F/77353R和309F/R），通过普通PCR方法，对本实验室2011−2012年采集于国内不同地区的对虾样品进行IHHNV（Infectious hypodermal and hematopoietic necrosis virus）检测，并对国内存在的IHHNV检出类型进行初步分析。检测结果显示，...
合浦珠母贝实时定量PCR内参基因的稳定性比较
马氏珠母贝 qPCR 内参基因 稳定性分析
2014/6/10
以合浦珠母贝（Pinctada fucata）为研究对象，应用实时荧光定量PCR技术检测了甘油醛-3-磷酸脱氢酶（GAPDH）、β-肌动蛋白（β-actin）和18S核糖体rRNA（18S rRNA）3个管家基因在合浦珠母贝不同组织、性腺发育时期、胚胎发育时期mRNA水平的表达情况。同时比较了BestKeeper、geNorm和NormFinde软件对试验数据处理的差异，从中选出合适的内参基因。结...
基于霍乱弧菌lolB基因保守序列设计1对特异性引物，建立了SYBR GreenⅠ实时定量PCR检测霍乱弧菌的方法。常规PCR检测仅霍乱弧菌扩增出大小为519bp的目的片段，其他3种病原弧菌均为阴性；SYBR GreenⅠ实时定量PCR，在Tm为86.5~87 ℃，扩增产物的熔解曲线只出现1个单特异峰，无引物二聚体，表明该引物具有较好的特异性。SYBR GreenⅠ实时定量PCR扩增曲线反映了PCR...
白斑综合征病毒PCR检测中使用dUTP扩增的PCR产物极限长度
dUTP WSSV PCR 极限长度
2015/6/1
依据白斑综合征病毒的序列设计了7对PCR引物，扩增长度从600bp到1 800bp。结果显示，使用dUTP代替dTTP，用普通Taq酶所能扩增的最大长度约为1 400bp。Mg2+梯度研究发现，扩增片段长度越长，最适Mg2+浓度越低。使用具有3’-5’外切酶活性的Taq酶无法扩增出任何长度的片段。
为适应口岸单孢子虫快速、准确、高通量检测的需求，建立一种基于PCR及焦磷酸测序技术平台的单孢子虫鉴定方法。以OIE推荐的PCR扩增方法获得单孢子虫特异基因，根据此基因的保守序列利用焦测序软件PyroMark Q96ID设计专用引物进行PCR扩增及焦磷酸测序，测得序列经比对分析确定为单孢子虫序列。同时采用PCR焦磷酸测序方法和OIE推荐的PCR方法对牡蛎样品进行检测。结果表明，所建立的检测方法可从基...
PCR结合变性高效液相色谱快速检测发酵乳酸杆菌
发酵乳酸杆菌 PCR 变性高效液相色谱 检测
2015/6/1
采用多聚酶链式反应结合变性高效液相色谱技术建立了发酵乳酸杆菌的快速检测方法。以编码发酵乳酸杆菌Lactobacillus fermentum延伸因子（EF-Tu）基因为靶基因设计引物，优化PCR体系，以加氏乳酸杆菌等26株试验菌株做特异性检测；并将标准菌株稀释成不同梯度，做灵敏度检测。试验结果表明，该方法有很好的特异性，且灵敏度高，检测限可达到100CFU／ml。
3种主要水产病原菌多重PCR检测方法的建立
鳗弧菌 嗜水气单胞菌 迟缓爱德华氏菌 多重PCR
2015/5/29
根据目前水产上常见病原菌鳗弧菌Vibrio anguillarum、嗜水气单胞菌Aeromonas hydrophila、迟缓爱德华氏菌Edwardsiella tarda的毒力相关基因，选择具有特异性的鳗弧菌调控毒力蛋白表达的toxR(Positive transcriptional regulator)基因、嗜水气单胞菌中重要的编码气溶素(Aerolysin)基因aerA、迟缓爱德华氏菌中编码...
贝类单孢子虫和折光马尔太虫二荧光定量PCR方法的建立
单孢子虫 折光马尔太虫 二重荧光定量PCR
2015/5/29
根据GenBank中单孢子虫和折光马尔太虫基因序列，用Primer Express 2.0软件设计了两对引物和两条TaqMan探针。对反应条件和试剂浓度进行优化，建立了能够同时检测单孢子虫和折光马尔太虫的二重荧光定量PCR方法。该方法对单孢子虫和折光马尔太虫的检测敏感性达到40个模板拷贝数；此外抗干扰能力强，对单孢子虫和折光马尔太虫不同模板浓度进行组合，仍可有效地同时检测到这两个原虫。该方法对派琴...
贝类派琴虫PCR检测方法的建立及初步应用
派琴虫 PCR 应用
2015/6/1
根据派琴虫的基因保守序列设计了特异性引物，对派琴虫的DNA进行PCR扩增并将产物克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明，扩增大小为596bp，与预期扩增序列同源性为99.8%。该PCR方法检测灵敏度高，最低可检测1pg的派琴虫DNA；特异性强，对荧光假单胞菌、嗜水气单胞菌、大肠杆菌、葡萄球菌、副溶血弧菌、沙门氏菌、诺瓦克样病毒等贝类病原体的扩增均为阴性。用该PCR技术对广西沿海的104份牡蛎、4...
利用PCR 技术快速检测水产品中副溶血性弧菌
副溶血性弧菌 PCR 检出限
2009/7/14
[ 目的] 对副溶血性弧菌的检测进行研究。[ 方法] 采用聚合酶链式反应( PCR) , 以标准菌株( 单增李斯特菌、哈氏弧菌) 作为阴性对照对3 株副溶血性弧菌进行特异性扩增, 扩增引物采用副溶血性弧菌tl h 基因中的tlh-3 和tlh-4 , 同时利用PCR 对人工污染的白对虾中的副溶血性弧菌进行检出限测定。[ 结果] 结果表明, 通过PCR 扩增, 副溶血性弧菌在约449bp 处扩增出特...