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CRISPR/Cas9是源自细菌获得性免疫系统的新一代基因编辑技术，在化学生物学、生物医学及基因治疗中具有潜在应用前景。CRISPR/Cas9技术使用引导RNA(single-guide RNA，sgRNA)识别靶标基因，并招募Cas9核酸酶对基因组进行切割、编辑等操作。然而，由于sgRNA识别基因组存在非特异性结合作用，现有CRISPR/Cas9技术应用于基因编辑时存在一定的脱靶效应，且缺乏对疾...
Notch信号转导通路对鼻咽癌的发生、发展及维持肿瘤干细胞的自我更新等具有重要作用，既往研究方法难以使Notch通路中特定基因功能完全丧失。本研究旨在利用CRISPR-Cas9基因编辑技术构建Notch1基因敲除的CNE2鼻咽癌细胞系，并观察Notch1敲除对CNE2细胞增殖、辐射敏感性的影响。方法：采用蛋白质印迹法（Western blot）检测人鼻咽癌细胞CNE2及鼻咽正常上皮细胞NP69中N...
CRISPR-Cas9系统的发现和应用为快速、定向的植物基因组编辑、突变体创制和开展植物功能基因组研究提供了新的技术工具。在本研究中, 我们利用CRISPR-Cas9系统, 对水稻A类MADS-box转录基因OsMADS15进行定点基因组编辑。结果显示, 该体系在T0代即获得3个不同的9522Osmads15双等位突变株系: 株系9522Osmads15-1等位1在靶点缺失1个碱基A, 等位2在靶...
生菜CRISPR/Cas9基因编辑体系的建立
生菜 农杆菌介导遗传转化 基因编辑 CRISPR/Cas9
2018/12/26
CRISPR/Cas9基因编辑技术已经成功应用于多种植物基因组的编辑, 但是在生菜中鲜有报道。本研究拟在生菜(Lactuca sativa L.)中建立CRISPR/Cas9基因编辑体系。首先根据生菜FANCM基因序列设计靶位点, 构建Lsfancm-CRISPR/Cas9载体。然后以生菜子叶作为外植体, 通过农杆菌侵染、共培养、愈伤组织诱导、芽再生及生根培养等过程, 对生菜进行农杆菌介导的遗传转...